- 基因测序的步骤是什么
- 情境教学的几种创设方法
- 你知道日本的哪些冷知识
- 儿子沉迷“我的世界”这种游戏怎么停止他
- 你见过最无耻的邻居是什么样子的
- 《我的世界》有哪些优点
- 你看过最血腥的电影是什么
- 和异性出差时有过什么难忘的经历
- 最近几天宅在家里发霉了能推荐几个动漫吗,
- 历史上有哪些臭名昭著的实验
基因测序的步骤是什么
PCR产物就测序技术更名成为分子生物学和基因组学研究中的一个重要的是技术,应用广泛作用于基因突变检测、遗传性疾病确诊、单核苷酸多态性研究、基因组拼合序列群等.与民间克隆测序技术相都很,再对PCR扩增的DNA并且测序,会省了耗时的克隆步骤,尽量的避免了现代的细菌培养,模板提取等重复性高操作,也可以从少量的远古时期样品中能够得到正确的的DNA序列信息.PCR产物就测序技术本身飞速、简便、很稳定经济的优点.试验试剂
PCR扩增的双链DNA模板
长约20个核苷酸的DNA引物
DNA聚合酶
测序胶
0.1mol/LDDT
α-32P-dATP
dNTP/ddNTP混合物(80μmol/L/8μmol/L)
dNTP(dCTP、dGTP、dTTP各0.75μmol/L)
测序反应缓冲液:40mmol/LTris-HCl(pH7.5),20mmol/LMgCl2,50mmol/LNaCl
中止缓冲液:95%甲酰胺,20mmol/LEDTA,0.05%溴甲酚绿,0.05%二甲苯腈
试验步骤:
1、4个微量离心管中各一并加入dNTP/ddNTP混合物2.5μl,混合物37OC温浴5min,备用.
2、在一个空的化学物质离心管中组建1pmol的PCR扩增双链DNA,10pmol测序引物,2μl5×测序缓冲液,加双蒸水至总体积10μl,96OC加热8v/s,冰浴泠却1min,4OC10000g离心10s.
3、加入2μl预冷的标记混合物(dCTP、dGTP、dTTP各0.75μmol/L),α-32P-dATP 5μCi,1μl0.1mol/LDDT,测序酶2U,加开水至15μl,混匀后摄冰上220h,箭头新三个合成的DNA链.
4、在第1步骤的4个管中各加入3.5μl箭头反应混合物,37OC温浴5min.每管各一并加入4μl暂时终止液.
5、样品在80OC的水浴中热变性5min,每一泳道加2μl加到测序胶上,电泳分离那些个片段.
注意事项:
1.?PCR产物要有一定的长度(>200bp),毕竟测序结果平行放置20-30bp的电泳峰图的准确性较低.
2.?裂解PCR产物可实际离子交换层析使测序的DNA段与反应其余的dNTP及引物分离;也可通过琼脂糖凝胶电泳,将PCR产物与非特异性测序产物和引物分离爆炸开来;如果不是体外扩增的特异性较高时,可再实际酚:氯仿裂解,乙醇沉淀的方法来纯化.
3.?测序引物设计原则像PCR引物设计,可在DNA合成仪上合成20个70左右的核苷酸作为引物,经高压液相色谱分离或聚丙烯酰胺凝胶电泳裂解后,表就行照相显影剂测序引物.
PCR循环测序法
PCR停止循环测序法是将PCR扩增和核酸序列分析技术相结合,最终达到形成的一种法测核苷酸序列的研究方法,也称作线性扩增技术测序.该方法采用PCR仪加热使DNA模板变性,在TaqDNA聚合酶作用下,以温度循环模式在模板上参与多轮的双脱氧核苷酸测序反应,线性扩增技术红色标记的DNA分子.
PCR停止循环测序法与以往的测序方法而言,其优点取决于人:有所会减少所需的模板量;能增强测序反应才能产生的信号,减少了操作的复杂性,且聚合酶的用量降低;可在小量制取的模板上并且筛选反应;高温下通过的测序反应使DNA聚合酶催化的聚合反应能按照模板二级结构的区域;双链闭环DNA这个可以就才是反应模板应用,用不着作先行碱变性处理.因此PCR停止循环测序法也能简单的、急速地检测特定序列,而,PCR运行测序法在核酸序列分析研究中造成应用范围的重视.
试验试剂:
DNA测序试剂盒
dNTP
ddNTP
丙烯酰胺
双丙烯酰胺
尿素TEMED(N,N,N‘,N’-四甲基乙二胺)
过硫酸铵
6%测序胶:6%丙烯酰胺,7mmol/L尿素,1×TBE.
10×测序缓冲液:100mmol/LTris-HCl(pH8.8),500mmol/LKCl,40mmol/LMgCl2,0.01%明胶,20μmol/LdATP,50μmol/LdCTP,50μmol/LdGTP,50μmol/LdTTP
中止水配液:ddATP(600μmol/L),ddCTP(600μmol/L),ddGTP(100μmol/L),ddTTP(1000μmol/L)
中止缓冲液:95%甲酰胺,20mmol/LEDTA,0.05%次甲基蓝,0.05%二甲苯腈
试验步骤
1、4个小离心管,各个小管一并加入3μl的终止混合液,将管子放在旁边冰上.
2、在DNA模板中加入引物(4pmol),4μl10×测序缓冲液,10μlα-32P-dATP,2UTaqDNA聚合酶,加双蒸水到30μl全部混匀,每管7μl加入上面4个小管中.
3、反应液上加30μl的石蜡油.
4、95OC30S,50OC30S,72OC60S共30个循环,可根据详细的情况参与适度的调整循环条件及循环次数.
5、反应结束后在油层下组建5μl的终止缓冲液并用加样枪混匀.
6、上样前将样品在大于080OC的水浴中热变性5min,每一道加2μl加到测序胶上,电泳分离那些片段.
注意事项:
1、制备方法测序模板:PCR测序的产物这个可以经低熔点的琼脂糖凝胶电泳分离纯化回收后,用于序列分析;可经过柱层析分离纯化,能去掉PCR反应后残余的dNTP和引物后,作用于序列分析.PCR产物也可不经纯化直接用于测序,不过这个测序才能产生的结果极差,个人建议测序前应参与PCR产物的分离提取.特殊标准的质粒制备方法所分离提纯出的质粒或才是测序模板使用.用标准方法制备方法的M13噬菌体、粘粒、λDNA都适合照相显影剂测序模板用.但要尽量的是反应体系中不失去与引物相补的非目的基因序列,否则不很快就会可能导致测序实验的失败.
2、测序引物:测序引物是指合成的与测序模板链特异性互为的寡核苷酸序列.用些α-32P-dATP和T4多聚核苷酸激酶对引物的5‘端接受标记,反应体系中引物、激酶和α-32P-dATP要达到在最佳的方法的比例,以能得到高比活性的标记引物;也用些α-32P-dATP标记新合成套装的DNA链.引物的浓度不宜过早高,否则太容易连成引物二聚体,或产生非特异性的基因扩增引物.
3、酶:各种极度缺乏3‘—5‘端外切活性的耐热DNA聚合酶都可以主要用于循环测序,其中TaqDNA聚合酶在DNA测序中之一广泛.虽说应用PCR循环测序法能简单的、飞快的参与基因序列的法测定,但仍从未渐渐适应如此大规模DNA序列法测的需要,而PCR循环测序法、荧光标记和自动出现测序仪的同盟使用拥有如此大规模基因组测序的主要技术.该技术是区分荧光标记引物或双脱氨核苷三磷酸,反应产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后,经特定的事件的DNA序列分析仪和分析系统处理待测的DNA序列.它的应用缓解了DNA序列法测定的工作量,提高了测序的效率.
情境教学的几种创设方法
情境教学是一种情境教学啊是场景、激起学生欢腾的情绪、把情感活动与认知活动增强出声的一种教学模式.物理是一门自然科学,它与生活直接联系亲近,在物理课堂教学中,该如何把本身知识性的实际中情境搬回课堂,以情境中的问题帮忙解决为需求,放出学生在环境中突然发现问题、分析问题和解决问题的兴趣和自信,最大限度地都没有达到使学生掌握到知识的目的,这真心到场人员物理教师细思.本人生克制化多年的教学经验,浅谈几种物理情境的情境教学方法.1.生克制化生活现象充分展现情境
物理来源于生活,新课标也特别要求从生活走入物理.依据学生日常相互到或已学习积累的生活经验来学生自主发展物理情境,不但能紊乱学生的共鸣,掀起学生的思考;也能很好地能够体现生活一切的一切有物理,物理就在我们身边.比如,最简单的:人我想知道为什么能向后走路,汽车转弯的时候,我想知道为什么人会有侧倒的感觉?又如公路上有交通意外时,警察是怎么推测肇事车辆刹车前时速的等.学生是认知的主体,只能学生积极组织到认知观活动中来,学习才能快速有效地通过.因此教学过程中,要充分调动学生的积极性,引导学生参与到教学活动来.如在教授竖直平面内的圆周运动时,我拿了一个盛了水的杯子,向学生提了一个问题:怎么让杯子倒转,不过杯里的水却一滴也不流出来?可是一位平时很性格内向的同学举手了,因此顺利的能做到了老师的要求,以外同学赞赏的目光热烈的气氛的掌声,这位同学露出了难得的笑容.一个小小的情境可能就给这位学生带来了学习的信心和对物理的热情.由演示学生自主发展了启发学生发掘问题、思考问题、探寻中事物本质属性的物理环境更大地释放了学生的兴趣和求知,能提高了学生学习的主动性.
2.用来实验创设情境
物理是建立在实验基础上的一门学科,教师应在课堂教学中尽可能地电脑设计一些简单点、有启示性的实验,让学生围绕另一个专题展开实验探究,在实验步骤活动的情境中,可以体验成功的喜悦,精心培育学生的创新精神和科学素质.或者,讲到力的合成与分解的或是内容时,让学生用铅笔、绳子、重物来感受滑动摩擦力.让学生用筷子和橡皮筋上用平行四边形,了解合力和分力的关系等.
3.凭借自然现象创设情境:
自然现象情境是指教学中借用客观意义的自然现象来情境教学物理问题的一种情境.如为么我们能听着回声?雷电是怎样才能才能产生的?又如阳光下吹出的肥皂泡上为么会呈出五颜六色的花纹,这是学生童年时每天都能见到的现象.孙悟空是真的能腾云驾雾吗?一个跟斗是十万八千里吗?列举自然中学生熟悉的物理事实、现象在内过程的实例或问题,也唤起学生的表象和增强学生再产生问题的挺好的物理环境.情境的运用,给物理教学给他你生气、给予欢乐,同时也可以充分培养学生的问题意识.
4.用来物理故事创设情境:
物理故事这个可以是物理学史料、科学家轶事.有目的的、最恰当的设置,可增强学生的学习热情,发展学生对科学的好奇心、求知欲,使学生乐于设计实验自然界的奥秘,再体验到深入自然规律的艰辛与喜悦.
或者通过自由落体运动教学时,推荐伽利略运用森严的戒备的逻辑推理,彻底了亚里斯多德的落体理论,生动继续讲述传说中的比萨斜塔实验,既能释放学生学习物理的兴趣,又能可以展示自由落体运动的物理情景.明·杨慎接受万有引力定律教学时,可以引导出牛顿认真的思考苹果落地的故事,培养和训练学生在生活中善于观察、喜欢思考的良好习惯.
5.依靠数字多媒体技术创设情境
多媒体等像现代技术能跨越时空的限制,生动形象地再次呈现生活情境,也能将完全不同的情境通过整合,但是高大光辉地展示更多情境的核心内容,使学生在较短的时间内在头脑中建立起起低些完整的物理过程,有助理解和记忆,可极高地增强学生学习物理的兴趣和学习效率..例如,天体运动;神七发射;嫦娥奔月;原子结构分成、原于核的人工放射性衰变;电磁感应、楞次定律、链式反应、光电效应等,都是可以凭借多媒体演示,好处学生更好地所了解物理规律的本质.
你知道日本的哪些冷知识
我的一个初中同学,她娶了日本人,我去日本找她玩,她跟我说,在日本有很多女人都想娶和尚,我听了结束后不太解释,和尚能结婚的话,那就第一次好像听说。我那个初中同学,她叫阿丽,初中的时候,我和她是同桌,关系挺好,我和她差点没就成了一对情侣,大专毕业的时候,我跟她直接表白了,但她跟我说她要去日本留学,我说我可以不等她,但她让我别等了,她说她也到底以后还会应该不会回来。
可是我们做不成情侣,但我们依旧还是好朋友,只是因为不常联系联系了,2014年的时候,她忽然间再打给我,跟她说她要结婚了,请我进来日本喝她的喜酒,我当时忙得走不开,就没有下来了,只是因为在上深深的祝福了她,说以后有时间一定会进来日本找她玩。
等待2015年的时候,我有时间了,就跟她告诉我过去日本找她玩,她明白了后很很开心,我简单点地收拾东西了一下行李,带了一些家乡的特产就向北出发了。
我买的机票是从深圳宝安国际机场向东出发的,到日本的成田国际机场,我看了一下时间,要坐二十多个小时的飞机等到了日本,中途的要转一班机,是在周水子国际机场一丝转机的。
转机之后,我就飞机里看见了日本的空姐,她们长得很漂亮啊,娇小玲珑,很温柔似水,但她们的中文说的很好,很标准的普通话。
飞机起飞前,一个空姐的举动把我吓到了,我当时就没系安全带,她走过去我旁边,突然就跪了下了,然后就帮我系安全带,我没想明白了,真是莫名其妙的怎末就跪了下了了,我到日本就跟阿丽说了这种事情,她把原因告诉了我,我才明白过来。
日本的空姐在帮我不系安全带的时候,我在她身上闻到了一股清香的味道,很香水的味道,我也要了那个日本空姐的,她也很豪爽地把给了我,我是寻思到了日本结束后,想要把她约不出来一起玩。
坐了一天的飞机,终于成功到了日本的成田机场。下了飞机之前,我就在机场里找了一个位置坐下后,等阿丽过去找我,她说她亲自出马过来接我。
当时机场里面人很多,我还怕她一直找不到我,我等了十几分钟,忽然间有人拍了一下我的肩膀,我转头一看,是一个女人,而这种女人应该是小珊,我们巳经很多年没见了,但我我还是能一眼认出她,那一刻我们都很开心不,我们还深情的拥抱了一下。
阿丽让我去她家里住,跟她说家里有空房间,我当时脑海里出现了一段电影情节,感觉去她家里住不太好,并且她老公也自己在家,不太更方便,我就跟他说住酒店就行。
她告诉我我们太久没见,一定要多多见见面,她来帮我找酒店。她是自己驾车上来的,她有一辆代步的小轿车,我们手里行李走进了机场,可以找到她倒车的地方,然后把把行李扔到车上,坐上车,系好安全带,后再就出发去去酒店了。
去酒店的途中,我发现自己日本的街道相当彻底干净,地上是也没垃圾的,但有一点真是奇怪,我一直都没有看见了有垃圾桶,我问阿丽:街上那你彻底干净,我想知道为什么也没垃圾桶?
阿丽说:在日本街道上是很少会随意放置垃圾桶的,日本人外出的时候,一般都会自己带一个垃圾袋,以备万一不时之需。白天的时候,街上的确是很干净,但到了凌晨的时候,又是另一番景象了,特别是车站附近的街道,地上会有很多垃圾,很脏,也有居酒屋几个地方,有很多客人喝洒喝到吐,也是在街上吐的,吐得到处都是全是,臭熏熏的,到了清晨的时候,变会有清洁工来打扫清洁,所以才白天的时候,我们看见了的街道那么弄干净,当然大都清洁工的劳动成果。
我去日本的时候,天气肯定比较冷的,只不过我注意到日本的女孩大冬天的都穿着超短裙,一点也真的不怕冷,但那就光着腿的,保暖裤都还没有穿,大部分的日本人长得比较好矮小,日本女孩的腿型不太绝对好看,腿很短,感觉她们穿裤子还会好看一点。
街上有很多人是带着兴奋口罩的,阿丽跟我说,戴口罩是日本人的一种生活习惯,以前日本种植了大量的杉树,杉树开花了的时候,花粉会飘得到处都是,有些人对花粉过敏,还得戴口罩阻绝,久而久之日本人就养成了一种戴口罩的习惯,现在很多人出门儿都会戴口罩,有些人是是为卫生,而有些人是为了遮盖自己的素颜。
也有日本的那些个建筑物,大多数全是比较矮的,去酒店的途中我只见到两栋还好比较比较高一点的建筑物,阿丽说是因为日本属于地震好发于手指地区,建筑物建的太高反而不不会有危险,但是被地震破坏的时候,损失的成本会太大,
到了酒店后,阿丽就面带我去前理入住手续,她和前台的服务员也是说日语的,我一点也听的懂,花了十来分钟才办理完手续,阿丽拿著一张房卡,带我出来房间。
房间的环境还是可以,应该是稍微有点贵,单人房都要4500日元,但还只有住一个人,如果不是要多加一个人,还得再给3500日元,不像其余地方的酒店,甚至是单人房都也可以住两个人,但是我还是能免费的,只能说日本人太会生意人了。
我把行李搁下结束后,阿丽就带了我去她家,她说要推荐她老公给我了解,顺便在她家吃一顿饭,然后把再带我出去玩。
阿丽她家都很大,有两层,一楼要注意是用处会客,应该是客厅,二楼是房间,我们晚上到家的时候,她老公还是没有下班时间。到屋里前的,阿丽叫我把鞋脱了,她拿了一双拖鞋给我穿上,他说在日本去别人家是一定要换拖鞋的,不然就是不尊重主人家。
走进屋里之前,阿丽给我倒了一杯水,她让我坐一会,他说她老公马上就下班回去了,她先去烧饭,我一个人站立挺不自在的,我就说去厨房帮她的忙,念书的时候,阿丽是没吃过我做的饭菜的,她明白了我的厨艺非常好,我肯帮忙,阿丽说高兴都来不及。
烧饭的时候,阿丽跟我说在日本厨房是重地,如果没有也没主人家的邀请,最好就别去厨房帮我,这是一种很不礼貌地的行为。
她还说待会吃饭的时候,一定要吃的大声地一点,我说那样可能不太好吧,她就跟我说在日本吃饭,吃的大声叫说明食物很好吃呀,也是对厨师的一种都尊重,也有吃东西时的时候最好别整理一番衣服或则摸头发,日本人觉得这样是很不卫生的,我总觉得日本的这些个礼仪稍微有点花里花哨。
做到饭不多久,小美她老公就下班时间回去了,他出去见到我的时候有点儿惊异,他换好鞋子然后就走进来对我鞠了一躬,把我吓到了,我连忙把他扶出声,他说了一句中文:你那是阿丽的朋友吧?他的中文不太流利地,也到底是他自学的,那就阿丽教他的。
我跟他说:是的,我是阿丽的朋友,刚到日本,不打搅。
当时气氛好像有点为难,阿丽就说:别躺着,忙不迭地进来吃饭不。
吃饭的时候,我听从阿丽说的吃得很高声叫,自己都感觉有些不太好意思,他们两个也吃得很大声地,吃饭的时候,没怎摸答话,全都全是低着头在吃东西,吃饱结束后,她老公就去煮茶喝了,我们边喝咖啡边聊。
她老公问我想要在日本待一段时间,他说日本有很多好玩的地方一定不要错过一次。
我说:待半个月70左右吧,第一次来日本,一定要多多打听一下一下日本的风土人情。
我以前有人说日本的医疗水平很高,也可不知道是真肯定假,我就问她老公日本的医疗水平咋样。
她老公说:日本的医疗水平都很高度发达,而且医保制度也也很完善系统的,报销的比例要看年龄,学龄前的儿童报销医药费是80%,达到学龄且在70岁100元以内的人保险报销是70%,70岁以上的人报销的比例比较比较高,这个可以保险报销90%。
日本不光医疗福利好,并且教育福利也挺好,日本的孩子从幼儿园上到初中大都能免费的,学校还可以提供饭菜,校服,课本等等。
我们聊了很久,天色有点儿晚,阿丽和她老公就把我送回了酒店,阿丽跟我说,好好休息,休息一会行了再带我回来玩。
第二天,阿丽一大早就进来找我了,阿丽说,先带我去去看看富士山,他说富士山在日本被被赞誉“圣岳”,是日本民族的一种象征。
富士山应该世界上比较大的活火山之一,目前是处在休眠时间的状态,最后一次火山喷发是在1710年,然后再一直休眠到现在。
我去日本的时候是冬天,冬天的富士山被白雪覆盖,竟像是一座冰雪世界,与蓝天白云相相得益彰,相当动人。
看完美丽的的富士山结束后,阿丽就带我去日本的寺庙去参观,阿丽跟我说:在日本,很多女人都想嫁个和尚,和尚的收入是很高的。
我听了然后,一脸诧异地看着阿丽,阿丽看出了我的疑惑,连忙跟我解释什么,她告诉我:在日本当和尚本质上是一份工作,但应该一份收入相当比较不错的工作,日本的和尚是不必须戒七情六欲的,还是可以结婚了,并且社会地位也也很高。
日本还真够绝了,连和尚都能曾经的一种职业,真不知道日本人是怎摸想的。
去参观完,我肚子就饿了,我跟阿丽说想去吃寿司,我听说日本的寿司很鼎鼎大名,刚刚来一趟日本,怎么也得试一下日本的寿司。
去寿司店的途中,我看见了街上有很多自动贩卖机,我目测每隔100米是会有一台私运机,并且便利店也有很多。
我问阿丽:为什么有那你多私运机?
阿丽说:是因为用自动贩卖机的成本低,有很多店家为了节省成本,都会你选用贩卖机,在日本,大概有400多万台自动贩卖机。
日本的便利店是真有很便利,除了也可以在里面买某些东西外,还可以缴费,水费,电费,房租,天然气这些费用,都可以不在便利店交,便利店还可以不寄存行李申通,还是可以尿尿。
我还见到很是日本女人她们穿着和服很很漂亮,她们穿的和服款式都应该差不多,那就是颜色和花纹图案不太一样,我注意一点到一个细节,她们会在背后绑一个小枕头或是是蝴蝶结,一又开始我原本以为这只是因为一个装饰品,当时小文提醒我,在和服上绑小枕头代表是巳经结了婚的,而绑蝴蝶结是华指未婚未育,穿和服一定要特别注意这一点,千万不能绑错了。
到了寿司店之前,阿丽包了一个包厢,服务员带我们进包厢,然后把就去把茶水和餐牌拿上来给我们点单,服务员忽然间跪了下了,把我吓到了,然后再说了一句日语,我听不懂,我让阿丽叫那个服务员站起,别跪下来,太吓人。
听了然后就笑了一下,阿丽跟我说:在日本,服务员是这样的,去餐厅吃饭,服务员会跪下了帮你点餐后,你去店里买鞋,服务员会跪下了帮你拿衣服,下跪行礼是日本的一种礼仪,用不着太放在心上。
话又说回来,但她们这这样的行为,让我感觉道很不安然。
在等餐的时候,我内急,就回来了一趟厕所,日本的厕所真的是重新登陆了我对厕所的认知,日本的厕所的很彻底干净,而且也有一股清香的味道,马桶也是智能化的,我看了一下,有一个按钮上面写着“音姬”,我按了一下,然后再就听得了流水的声音,以前这是一个会模仿声音的功能,这样的话就可以不尽量避免入厕时的尴尬。
上完厕所后出去,点的餐早完全上齐了,吃之前,阿丽把手机拿来,我们发照片了一张照片,“咔嚓”一声就拍好了,阿丽跟我说日本的手机是根本无法调成音量设置的,那就是替防止会出现偷偷拍摄的现象,在日本偷拍被抓到后果是的很极为严重的,会严肃去处理被偷拍的行为。
日本的寿司很好吃呀,很新鲜的西瓜,很美味,一口一个寿司,还有刺身,日式乌冬面,这些都很比较好吃。
吃饱了然后,我和阿丽逛了一下,然后把就回酒店再休息了,又回到酒店我就你打给那个空姐,还想她约出去玩,响了很久都没有人接,我就把挂了。
我在日本待了半个月,知道一点到了很多东西,长见识了。
我虽然认为日本的国花是樱花,实在没想到菊花才是日本的国花,我还认为东京那是日本的首都,没想到东京只不过一个都市,日本是没有首都的。
日本的老年人是心里有气老的,搭公交车的时候,遇上老人乘车,是不要给他们不让座的,给他们孕妇让座,不但会遭到他们的白眼。
在日本,女人结了婚,一般大都在家里当家庭主妇,而丈夫的钱财是由妻子来分配的,在日本,假如离了婚,日本的法律规定丈夫是要每个月退给妻子生活费的,另外女人离婚要100天结束后才可以再婚,而男人离婚这个可以立玄再次结婚。
平均人对日本这样的国家应该有不一样的看法,不再去想成见再说,日本的文化确实是是有愿意怎么学习的地方,日本风景也很迷人,环境保护的很好。
但是日本人极为拘谨了,和他们一起相处有一种压抑感,很不舒服,如果没有长期在日本生活,生活,会很不养成的习惯。
儿子沉迷“我的世界”这种游戏怎么停止他
和他联机,如果没有是PE0.16以内的版本,教你几个指令/gamemode儿子游戏名0
/kill儿子游戏民
/teleport儿子游戏名x,y,z
/difficultly难度
/want儿子游戏名pumpkin9999999
/clear儿子游戏名
/weatherthunder
/timesetnight
/summoncreeper~~~
......让你儿子能感受到将近这些游戏的快乐
如果不是是PC端,输/takecommand_block
然后把依靠红石让你儿子感觉到将近游戏的快乐
你见过最无耻的邻居是什么样子的
程程遇见很奇葩的梅姓一家人。程程是租的房子,梅家是儿子接水电工程时,他老板出了钱租的房子才是宿舍给她们家住的。她们一家5口,占了3间房,有两间在二楼,一间做厨房,一间老两口的睡房,三楼有一间是儿子一家三口的睡房。整栋楼是独门独院的6层小楼房,从一楼到6楼,也没人不熟悉那几家梅姓的住户。就算是刚搬回一栋楼的住户,也能第一时间知道梅家人的存在,是因为他们家确实是是太“不厉害”了。
在外人眼里,一家人生活在一起会总觉得很她幸福,只不过梅家是个意外。原先老大爷有高血压,又六十花甲,只能帮下忙菜市场买菜煮饭,没精力帮带孙子,煮饭之余就外出捡瓶子纸皮之类的,他捡废品的座右铭是“不管你要不要,只要你你不装在你家里,也是我的”。比如6楼邻居去超市买菜回来了,到了楼下才想出声真有事忘记什么了,把整袋蔬果肉菜装在一楼大门口里面,过去不远的地方再回来时,那一袋子菜都无复存在了。邻居在想不可能是不翼而飞的,立剪叫楼栋长查监控,那个是梅家的老大爷顺走了。证据确凿,他立刻去找梅大爷要回物品,但应该晚了,肉菜果蔬现在也被梅大爷放进冰箱,连穿越小说合集的袋子也“劈手”丢到楼下空地里。梅大爷还把邻居痛骂了一顿,纵然有证据他也死不知道,还骂邻居故意找他的茬,之后在梅大爷的谩骂声中邻居都结束了了责问。这还不算完,梅大爷一路跟着一起邻居一路骂,让人感到莫名其妙是邻居跟梅大爷找不痛快,当时邻居恨不能有个地洞钻下去,之后肯定邻居给梅大爷说事情看错了了,大爷才再继续骂咧咧,不然的话唠唠叨叨。
程程刚黄道吉日过去时,由于太忙,还得赶着去原住房打扫卫生,就把热水器放在门口(当时不清楚会有贪小便宜的人),出去出去就都不见了。刚想你打问房东,隔壁邻居说不需要打了,你去梅家厨房一看就很清楚了。我听完还一头雾水,当时谁都知道了确实是梅大爷拿的。我其实想直接去叫他送给我,邻居说我去问会说不明白的,他太难说话了。程程索性退一步去找他儿媳,期望她能把热水器退还,可是他儿媳的回答让程程大跌眼睛。他说要找就去找她公公,不要找她,她什么都到底。程程心道他们一家人一天三餐都在一起吃东西,厨房突然多了一个电器,只不过又不是全新的,也不不过一点都很不起眼啊。
程程后来我们找房东说明此事,房东说他是小梅的工程承包商,是因为工程就没完工,自然工程款就不可能彻底全部结清,别的的工人都搬到了,只有一梅家一家人还赖在这里住,还一家占用带宽三家人的空间。房东说梅家人也很让他头疼,一家老小都不注重个人卫生,老的也养成的习惯高空抛物。厨房的垃圾就应该是往一楼空地丢,日积月累,都早就无法形成了一座小山。年轻的那对搬去三楼,家里还有一个一个婴幼儿,小梅他们房间连垃圾桶都也没。所有的生活垃圾包括小梅老婆的大姨妈纸,小孩的纸尿裤,也是换一次就丢一次,有时小孩拉的纸尿裤往楼下扔,在风的阻力下经常会会落在一楼住户的窗户上,一楼的住户都真不知道怒骂多少次了,跟梅家沟通和交流多少次都是没有用,我还是死不悔改。突然之间下完雨又出大太阳时,这样的味道也可以薰死好多蚊子,为此好多租客搬从里面出来刚满一个月就又搬去了。为求自保,房东只好请挖掘机上来把房子下面的垃圾堆清理过弄干净,并口头和解除劳动合同的通知住户,不准进入乱丢垃圾违者罚多少500元。从今以后梅家人乱扔垃圾大都悄悄的的晚上丢,没以前狂妄。这就真应了那句“又不是一家人,不进一家门”啊。
本我以为梅大爷是只不过年纪大,没有收入,才会做出决定极为不堪的事,其实并非如此,他是可伶之人必有可笑之处。程程搬到里面没到一个月,就从邻里的谈到中里得到消息,梅大爷现在的生活过得不怎么好,儿子儿媳不给生活费,老婆上班吗经常跟别人约会,确实他老婆会给生活费,不过都吃紧,连买菜的钱全是他卖废品去补贴一点。每天梅大爷5点7点起床,洗衣,菜市场买菜,做饭菜,不仅要为他6个月大的孙子买骨头煲粥煲汤,的要为一家打算一日三餐,儿媳从未不亲自下厨做饭,到吃东西时间还得老爷子上三楼叫她,还每餐都又不能少了肉食,这些应该确实是梅大爷血压高的原因之一吧。
顿了顿梅大爷血压高,他老婆“功不可没”。无论他干些什么在他老婆眼里也是错,都该安享晚年的年纪,却还在经受着妻子外遇,儿子不孝之子,成天为柴米盐油姜醋茶的日子犯难。在一次又一次二位老人跟儿媳生气吵架时,梅婆婆对儿媳可惜使出浑身解数,只要你她一突然开口,整栋楼的邻居那可是听的看得清清楚楚的,绝对的绕梁三日,不绝于耳,那声音,不去学美声,真的只是可惜了。
婆媳之间闹别扭说白那就是吃喝拉撒,说来说去全是那些个清官难断的家务事。.例如小两口多少时间没给生活费啦,儿媳懂持家过日子,拿儿子的钱去买衣服化妆品之类的。还说儿媳有时装束得浓装艳抹的出去招蜂引蝶,吃她儿子的喝她儿子的,住她儿子的,又不回来工作赚,带孩子都带不好,还越带越瘦。一个外人吃住在梅家还不谦让二老,稍微有点钱就寄回娘家。梅家不不需要这样的儿媳。
梅家儿媳也不是省油的灯,声音虽然没二老大,但是气势要比二老弱。儿媳骂梅大爷软骨头吃软饭,几十年来对婆婆软弱,做牛做马,婆婆带情人回家来住,不仅都不敢做声,还帮婆婆和婆婆情人洗衣做饭,三人同往,共住一屋,世间向来。梅大爷听着这般污言秽语的话语却没有什么波动。反到是婆婆狂喜七窍生烟,扯着嗓子的回应。
婆婆说儿媳算哪根葱,不姓梅的人不是她家人,并非她家人就没资格在梅家生活,能滚多远就滚很远。把这些年吃穿住行用的用钱还给梅家,孙子不能不能都带走。以后别吃梅家的饭,梅家不感谢她。儿子如果老子,多大年纪都能取到比儿媳年轻貌美的。儿媳当时也毫不示弱,说婆婆也不姓梅,也不是梅家人,你们凭什么说她?提出离婚可以啊,叫你儿子过来,立即出去起诉离婚,不离是小狗(狗躺着也中枪)。
原本仅仅听得她们吵的厉害不,非吵闹着都各自抄家伙,儿媳拽着孩子,二老敢杀他,只是因为动用工具增强自身气势。再再后来儿媳把门关起来,二老就站在门口互骂,儿媳和孩子在里面哭喊着,但是没有忘记什么回怼。此时有个邻居出去劝架,实在没想到劝架不成还惹祸上身,被二老骂哪里来的孙子,算那根葱,梅家的事哪里轮到一个外人插嘴了。邻居看形势严峻,进房坐山观虎斗,没成想差点就被二老把门踹坏,见邻居不打开门,就一直轻轻拍邻居的门,那拍门声可是震耳欲聋,也不知邻居当时是怎末恢复冷静的,有什么带走阴影。二老平时看着都没什么活力,总是吵架是真的都算上是专业级别,能从中午吵到晚上9点,精力值得嘉奖。待到他们儿子回去了,才算罢手,很佩服啊。
听完梅家儿媳,那也不算一个奇葩。嫌贫爱富,爱慕虚荣,喜欢占小便宜,自私贪婪。程程跟梅家一起住一栋楼,抬眼不见就低下头去见。而且程程住302,梅家儿媳住303,因为见面都会点头致意,不算太过于亲昵,只不过她专职带小孩,有时菜市场买菜逛街买东西也会出现。住处马路对面是个大超市,程程好几次在大超市接触梅家儿媳买铁棍山药把头尾被折断,只要你中间的,打称时工作人员说了她,可她说是小孩子不懂事玩断的。工作人员说,她家小孩可真懂事,铁根山药会折断去尾,鸡蛋稀巴烂了会偷偷的的藏在水果摊里,这话里有话也不知有没讽刺到她,看起来好像她内心挺强横的。
也有她跟别的地方邻居一起聊天时,老是说有个朋友住在某小区,有某朋友住在某别墅区,她家老公开X5,她娘家哥哥开奥迪,她舅舅住别墅……最后有一天她而且又跟二老总吵架,她亲哥哥来说她,楼下停着一辆比亚迪,09年的车,那时买这款车型连上车牌不用10万。后续声明一下,国产车又不是不好,肯定是她不不认识车标吧。而她老公的车当然外型跟马宝X5长的很像的奇瑞。说白有奶那是娘,她心中明白的这些住到高档小区的朋友当然是在某商业区开店铺的老板,也就是购买东西一回生二回熟的顾客和店主的关系。外界的时间越长,她的谎言就谣言不攻自破。
究竟是转性还是有什么原因,梅家儿媳突然间去工作好了,应该在某房地产做秘书的工作,但在3个月后又忽然间失业金,以前是被老板的什么东西人打了,况且发生什么事也无从判断报名考试。可能失业对她打击之太大,白天晚上都在你唱歌,常常晚上1点多还在唱,跟房东投诉了也也没用,却独立特行,房东也拿她不可能,那时好像是她和她婆婆在这里住,以外酒店级别已回家里。她那样的行为如果那用是别人,她婆婆更改要大吵大叫,骂天骂地的,再说那就是别人吵到她们梅家休息一会就要不,她们梅家的人爱怎摸玩别人管不着,那怕是深夜也照玩不误。我记得有一次晚上10点程程给母亲,老人有点儿耳背,需要高声跟人说话,时就比平时增强分贝,隔壁梅家婆婆就来敲程程的门,大声喊道喂,晚上最好不要这样吵,影响到她们休息啦,瞬间心里一万个马泪飘。
而梅家婆婆太出名,她华指处的物业公司招清洁工时,怎么也招不了,谁都怕跟她和她相处。她老公实在受不了她的暴脾气和怪性格,回家来几个月然后,又来照顾好她。而且她活了55年都肯定不会烧饭,前提是要有一个人一直照顾她的生活起居。也许你梅大爷总觉得回老家过得安安心一些,他来了十几天又回老家,现在只剩梅家婆婆一个人在这里工作生活。一个人过着不孤单寂寞的生活。
又一次在前段时间,程程搬去了,依旧不用跟那几家奇葩的一家为邻。
《我的世界》有哪些优点
1.自由度高,在游戏中,只需你顺手开一个存档,你就也可以自如建筑,生存,作到死,动迁,没人逃走你,如果你开的是多人联机;2.画质成熟,说不定有人会说mc的画质不好看点,像马赛克,但实际上沙盒游戏不是这样的的画质,像mn的画质实在是太低幼,完全没有不像沙盒的样子;
3.选择不少,你这个可以你选生存模式,所创造的模式,冒险模式,在一旁观看模式,不过光是是生存模式难度就有简单点、普通地、困难、和平这些隐藏的极限模式;
4.玩法数千,你是可以你选原版能生存,也可以不选择类型加模组,手指轻轻地点几下,新世界的大门就会像你大敞;
5.的确正版,mc在上世纪就结束公测了,在2009年就公开的先发布了第一个版本,比许多沙盒游戏都要早【除泰拉瑞亚等】,说不定会有借鉴吸收,但绝不会存在完全没有抄袭的可能
6.可难可易,你这个可以你选择努力刻苦想研究红石指令,建筑工艺,也这个可以只是蹦蹦哒哒的光明生存,你想紧张就紧张,你想很简单就简单啊
你看过最血腥的电影是什么
是对很多大尺度的无节操电影,很多人看完这部电影,很多人在乎的全是里面大尺度镜头,也不是别的地方一丁点温情片段。但是那些下面推荐的大尺度电影,基本是让人会思考的,或者引人深思的,这100部电影但我精心挑选的重口味大尺度哦,被安利推荐!发条橙AClockworkOrange(1971)导演:斯坦利·库布里克演员:马尔科姆·麦克道威尔/帕特里克·马基/迈克尔·贝茨/沃伦·克拉克/约翰·克莱夫类型:剧情/科幻/犯罪地区:英国/美国简介:阿利斯(马尔科姆•麦克道尔)是一位掳掠的少年,他的特殊能量喜好是边听贝多芬的交响曲边女性,某次他刚刚进入一所别墅抢劫一番后,打残了该别墅的主人——一名小说家,用此特珠喜好羞辱了其妻子。后来是因为杀了一名单身好女子,阿利斯进了监狱并认可了特殊能量的人格治疗,出狱后,他对淫乐之事产生彻底的厌倦。但当阿利斯回到自己家时,周围人群没变化对他的旧看法,在诸多歧视的重压下,他冲到郊外一所别墅想喘口气,想这所别墅恰好他以前抢劫财物过的小说家的那所。而另外反组织首领的该小说家就是为了提升另外一种目的,囚禁了阿利斯。当这件事不暴漏小说家被捕时,其手下是为相对抗,更是扬言要把阿利斯可以恢复原来的性情,已经理他一旁的阿利斯大叫“我全部那样最好”。
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意志的胜利TriumphdesWillens(1935)导演:莱妮·里芬斯塔尔演员:阿道夫·/MaxAmann/MartinBormann类型:纪录片/战争地区:德国简介:1934年,德国最著名女导演莱尼•里芬斯塔尔(Leni Riefenstahl)受邀参加拍摄好了《我的世界》。影片由纳粹构思,第三帝国按出资比例赞助费,留下记录了纳粹巅峰时期的会议、和盛况。为对付拍摄好,帝国提供给无限制的经费,一百多人的摄制组,无数的聚光灯,十六名一流摄影师、三十台摄影机、二十二辆配备司机的汽车和身着制服的机动警官,这庞然且豪华的别墅的摄制队伍算上里芬斯塔尔天才的创造力和美学理念,为影史奉上了一部中最完美的东西也最受争议的杰作。《我的世界》被称作“最具权威性的宣传电影”,它多次获得获1935年电影节和巴黎电影节最佳纪录片奖。
收藏DeepThroat(1972)导演:GerardDamiano演员:HarryReems/LindaLovelace类型:喜剧/Adult地区:美国简介:琳达·拉芙蕾丝(琳达·拉芙蕾丝饰),一位始终不能在中至少的女人。经医生检查后打听到,她的竟然会位于喉咙深处。就是为了能够得到梦寐以求的,琳达结束在诊所里当起了护士,来温柔的呵护五彩男人的生理病痛,并内中能够得到享受和满足。这部创立美国电影先河,拥有影响最为深远的电影《我的世界》,于1972年在纽约时代广场上公映,在美国立马引起了狂热的风潮。全片大胆祼露的爱欲场面,真刀真枪的纪实拍摄手法,演变成了性解放人士与保守封建人士的凶猛论战。之后,影片在23个州遭禁,5个有关公司和12个演职员被告上了法庭。电影紊乱了各界人士的关注及争论,“”一词,更在水门事件中另外告密者的化名。
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和异性出差时有过什么难忘的经历
搜藏我是一个农民,所以我我辈子也还没有过国外出差的经历,只不过在年轻的时候,有一回我去市里办个事,却在那里意外地遇上了那个我单恋多年的女人。当时我们两个人应该有一些小惊喜,不约而同地的两个人就在一起我吃一顿饭。当时吃的什么东西东西我都忘记了,我就觉的会如此美景良辰,大好时光,晚上我们两个人是不是我应该要安排好一点有意思的节目呢?正巧,那天夜里有一个戏院里在演古装戏,我就邀请她晚上一起再去看一场古装戏吧,实在没想到她连想都没想,立玄就答应了我的请求。但而我们俩个人忍不住在同一家宾馆,所以我们俩个人就约那样最好,晚上7点钟在戏院门口,不见不散哟。
但是,让我倍感意外的是,晚上我一个人在那个戏院门口足有等了好几个小时,戏都演完了,也都不见她的身影。如此巧合的是第二天早上,我们又一同坐一个班车回到自己村里,在半路上,我就问她昨天晚上我想知道为什么赴约?她确定了很久,然后再就很平静无波的回答了我的一段话:她告诉我,昨晚是我故作不去的,我也明白了你的心意,但我觉的我们两个应该达到目前那样的友情的关系更好,我不想压制这种平静无波,可能我们互相间彼此都很怎么欣赏对方,我也很爱慕你的人品,但我们也没在对的时间遇到了对方,也就是说辈子我们两个人是有缘无份了,永远不会都不可能在一起,那就说,在情况下,在我们两个人的身上要是真的发生了什么点什么,那我们以后也要在同一村子里住着,邻里邻居的,那你微觉的很不好意思吗?所以才呢?我确定再三,我们俩个人还是把彼此都放在心里面,做一对鼎鼎大名的篮颜知己吧。我觉的这样才是我们两个人好是的结局。
真的一语被惊醒了梦中人,她的这段话如同醍醐灌顶般的一下子就让我神智了过去,当时我就觉的昨晚的那些想法确实是太龌龊了。还好那一回我只是因为在精神上出轨了一次,在上还就没强行突破,还没有对不起我的爱人。可不是什么吗?生活不过那是很平淡的,那来的这样的话多惊喜和艳遇呢?所以做君子千万没法糊思瞎想、挖空心思、痴人说梦的去盲人摸象。在平淡中收集快乐的,知足长乐,才是最求实际的选择。
最近几天宅在家里发霉了能推荐几个动漫吗,
海贼王,很多年后,一个小孩对这一个断了手臂的海贼发过誓:“我一定要成为海贼王!”他,就是本部动画的主人公。17岁,高172CM,被被称“草帽小子路飞”。小的时候,是因为吃了橡皮的恶魔果实,转成了橡皮人,全身也可以契约自由伸缩,当经过十年的修练,巳经能比较熟练掌握橡皮的能力。随后10年后,一个无比伟大的传说又开始了。这是个关于一群爱做梦孩子的故事,他们拥有热情,他们具备毅力,他们拥有梦想,他们具备伙伴!
“世代传承的意志,时代的浪潮,人的梦想,这些全是阻挡不住的,如果人们继续追求自由的解答,这一切就将从不停止!!!”这是原自《意志的胜利》中的一句名言。很很喜欢这两句话!
历史上有哪些臭名昭著的实验
我是萨沙,我来问。
只怕是纳粹死亡医生门格勒的双胞胎实验了。
门格勒比我们想像的,要年轻得多。
欧战爆发时,己巳年1911年的约瑟夫.门格勒仅有28岁。门格勒是一个医生,却在慕尼黑大学自学过哲学和人类学。
这么说,门格勒在是没有接触纳粹党以前,是个斩钉截铁地种族主义分子。
他认为雅利安人是最尊贵的种族,是当经过进化完了才能产生的种族优选的结果。
的原因门格勒的主要理念同纳粹是没有相同,双方很快地站到一起。门格勒很早前的,就对双胞胎有兴趣,其实这是人种学的突破口。
他曾说“人和狗一样,也有谱系,有人在实验室里培养出了良种犬,我也能在里面重视培养出抗逆性强人种来。”
而且双胞胎的遗传性质不可能完全一致,实际研究他们的异同,这个可以找捷径各个相关证明人种学的优生理论。
这是是因为研究普通人的时候,会造成环境因素和遗传因素的极为严重影响。
谁都清楚,儿子不可能百分之百同父亲一样,还遗传了母亲的基因。所以,你不是那么容易锁定后儿子同父亲的遗传进化的或缺陷,到底是在什么东西方面?
而双胞胎因为自身的特殊性,低些很容易证明这一点。
门格勒曾经的研究什么过双胞胎,但仅仅停留于浅薄的水平,对双胞胎也就没任何上的伤害。
一下子,他不行最简形矩阵于内科医生的研究,1943年正在再次进入奥斯维辛集中营参与人体研究。
在门格勒看来,集中营的双胞胎本来是会被杀死,他的研究无论多也是没有关系。
从1943年到1945年,门格勒研究什么了近1500对双胞胎,其中只有一过了100对存活下去。
门格勒的试验是嗜杀和泯灭人性的!
最初,他仅仅同以前一样,测量双胞胎外表全部的数据,甚至包括每一寸皮肤。
而现在很快地门格勒因此就腻味了,其实是没有什么呢意义。
他就开始将双胞胎击杀,随即解剖尸体取出器官进行测量,以发现到内部器官的异同。
随后的试验逐步可以升级,以测试双胞胎受到外界影响时,会再次出现该如何的完全不同变化,以完全锁定遗传的影响。
这些试验五花八门,比如说给双胞胎注射致命细菌,远处观察他们感染炎症后的表现;给双胞胎输入不条件符合自己的血型,仔细观察他们生命后的变化;对健康的肢体参与手术截肢,仔细观察两人的不同;甚至还在无麻醉情况下接受其它手术,观察双胞胎有所不同的反应。这个手术只有一对双胞胎能够活下来,两人被取下一个健康的肾脏。
之所以他们难以幸存下来,通常是门格勒对两人复原时的差异有太大兴趣,不光参与观察。
更强悍的是,门格勒还数次缝纫双胞胎在一起以人类创造连体婴,这对你可怜的双胞胎一下子活着的。
杀死了1000多对双胞胎,很显然门格勒肯定有不菲的研究最终。
而现在,门格勒对这些个试验不过并没有太去在意,不仅仅另外在集中营的业余爱好消遣。
他有繁重的本职工作,就是专门负责甄别犯人是否需要应该留下来工作一段时间再行刑,我还是因年老体弱真接送回毒气室。
目前发现到门格勒唯一的医学研究证据,是一本笔记本,里面内容太没内涵甚至的确是过于草率,也没有留下来一丝一毫有意义的资料。
让人难以置信的是,门格勒接受实验双胞胎孩子的死亡率,战锤94p左右。
但,这个死亡率竟然高于奥斯维辛儿童普遍死亡率。因为儿童被其实是还没有劳动力的,一旦直接进入集中营基本再也可以半个月内就扔入毒气室,所有毒晕。
建国时以后,在全世界围剿门格勒。门格勒是被地下纳粹组织的保护,根本不会被抓住,但一直到1979年都在惊愕和逃亡中,在巴西、阿根廷、巴拉圭等南美国家游窜,有几次差点没就被一把抓住。